12 一般試験法 2.22 蛍光光度法

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第十八改正日本薬局方第一追補

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8. 用語
クロマトグラフィー総論〈2.00〉の定義に従う．

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9. 注意

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標準被検試料，内標準物質，試験に用いる試薬及び試液は測

一般試験法の部

2.22

2.22 蛍光光度法の条を次のように改める．

蛍光光度法は，蛍光物質の溶液に特定波長域の励起光を

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照射するとき，放射される蛍光の強度を測定する方法であ

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る．この方法はリン光物質にも適用される．
蛍光強度F は ，希薄溶液では，溶液中の蛍光物質の濃度c

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及び層長l に比例する．

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F ＝kI0φεcl

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k：比例定数

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I0：励起光の強さ

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φ：蛍光量子収率又はリン光量子収率

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蛍光量子収率又はリン光量子収率
蛍光量子又はリン光量子の数
吸収した光量子の数

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一般試験法の部 2.26 ラマンスペクトル測定法の次に次の

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二条を加える．

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2.27

近赤外吸収スペクトル測定法

蛍光光度法

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蛍光強度は溶液の濃度，温度，pH，溶媒又は試薬の種類及
びそれらの純度などによって影響されることが多い．

定の妨げとなる物質を含まないものを用いる．
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3. 注意

＝

ε：励起光の波長におけるモル吸光係数
1. 装置

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近赤外吸収スペクトル測定法は，試料による近赤外領域にお

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ける光の吸収スペクトルを測定し，その解析を行うことにより，

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物質の定性的又は定量的評価を行うための分光学的方法の一つ

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である．

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近赤外線は，可視光線と赤外線の間にあって，通例，750 〜

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2500 nm (13333 〜 4000 cm-1)の波長(又は波数)範囲の光を指

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す．近赤外線の吸収は，主として赤外領域 2500 〜 25000 nm

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(4000 〜 400 cm-1)における基準振動の倍音又は結合音による

60

振動によって生じ，特に水素原子が関与するO−H，N−H，C

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−H，S−Hによる吸収が主である．

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近赤外域における吸収は，赤外域における基準振動による吸

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収よりもはるかに弱い．また，近赤外線は，可視光線と比較し

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て長波長であることから，光は粉体を含む固体試料中，数mm

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の深さまで侵入することができる．この過程で吸収される光の

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スペクトル変化(透過光又は反射光)より，試料に関わる物理的

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及び化学的知見が得られることから，本法は，非破壊分析法と

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しても広く活用されている．

通例，分光蛍光光度計を用いる．

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近赤外吸収スペクトル測定法は，既存の確立された分析法に

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光源としてはキセノンランプ，レーザー，アルカリハライド

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代えて，迅速かつ非破壊的な分析法として用いられるものであ

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ランプなど励起光を安定に放射するものを用いる．蛍光測定に

71

り，この分析法を品質評価試験法として管理に用いる場合，既

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は，通例，層長1 cm×1 cmの四面透明で無蛍光の石英製セル

72

存の分析法を基準として比較試験を行うことにより，その同等

を用いる．

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性を確認しておく必要がある．

2. 操作法

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本法を応用し，原薬及び製剤中の有効成分，添加剤又は水分

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励起スペクトルは，分光蛍光光度計の蛍光波長を適切な波長

75

について，定性的又は定量的評価を行うことができる．また，

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に固定しておき，励起波長を変化させて試料溶液の蛍光強度を

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結晶形，結晶化度，粒子径などの物理的状態の評価に用いるこ

測定し，励起波長と蛍光強度との関係を示す曲線を描くことに

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ともできる．さらに光ファイバーを用いることにより，装置本

よって得られる．また，蛍光スペクトルは，適切な波長に固定

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体から離れた場所にある試料について，サンプリングを行うこ

31

した励起光を蛍光物質の希薄溶液に照射して得られる蛍光を，

79

となくスペクトル測定が可能であることから，医薬品の製造工

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少しずつ異なった波長で測定し，波長と蛍光強度との関係を示

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程管理をオンライン(又はインライン)で行うための有力な手段

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す曲線を描くことによって得られる．必要ならば，装置の分光

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としても活用することができる．

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特性を加味したスペクトルの補正を行う．

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1. 装置

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蛍光強度は，通例，蛍光物質の励起及び蛍光スペクトルの極

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83

大波長付近において測定するが，蛍光強度は僅かな条件の変化

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びフーリエ変換近赤外分光光度計がある．

に影響されるので比較となる標準の溶液を用いる．

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1.1. 分散型近赤外分光光度計

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別に規定するもののほか，医薬品各条に規定する方法で調製

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した標準溶液及び試料溶液並びに対照溶液につき，次の操作を

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光路に置き，蛍光強度が60 〜 80％目盛りを示すように調整す

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る．次に，試料溶液及び対照溶液の蛍光強度(％目盛り)を同じ

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近赤外分光光度計には，主として分散型近赤外分光光度計及

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装置は，光源部，試料部，分光部，測光部，信号処理部，デ

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ータ処理部及び表示・記録・出力部より構成されている．光源

行う．励起波長及び蛍光波長を規定する測定波長に固定し，次

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には，ハロゲンランプ，タングステンランプ，発光ダイオード

にゼロ点を合わせた後，標準溶液を入れた石英セルを試料室の

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など，近赤外線を高輝度かつ安定に放射するものが用いられる．

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試料部は，試料セル及び試料ホルダーより構成される．光ファ

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イバー及びコリメーターなどより構成される光ファイバー部を

条件で測定する．波長幅は，特に規定するもののほか適当に定

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有する装置においては，分光光度計本体から離れた場所に設置

める．

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された試料部に光を伝送する機能が付与されている．光ファイ

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バーの材質としては，通例，石英が用いられる．

日本薬局方の医薬品の適否は，その医薬品各条の規定，通則，生薬総則，製剤総則及び一般試験法の規定によって判定する．(通則5参照 )